Среда "Криодерм"

Криодерм - среда для криоконсервации клеток на основе глицерина предназначена для использования в хирургии и офтальмологии при создании запасов жизнеспособных трансплантатов кожи и роговицы, а также для криоконсервации клеток в биотехнологии.

Данный продукт предназначен для исследовательских целей.

Инструкция по применению

1. Взять культуру с плотностью монослоя 70-80% (для клеток прикрепляемых культур), или 50-70% плотности суспензии (для клеток суспензионных культур).

2. Снять клетки прикрепляемых культур с субстрата при помощи диссоциирующего 0,25 % раствора трипсина в течение 5 минут при 37^оС (предварительно ополоснуть монослой клеток 5 мл 0,02% раствором Версена). Клетки суспензионных культур пипетировать и собрать в центрифужной пробирке.

3. Инактивировать трипсин при помощи среды, содержащей 10% сыворотки.

4. Осадить клетки центрифугированием 1000 об/мин в течение 5 минут. Удалить супернатант, не затрагивая клеточный осадок.

5. Ресуспендировать клетки в среде «Криодерм» из расчета 1,2-1,5 млн/мл.

6. Разлить приготовленную суспензию по криопробиркам, герметично укупорить замораживаемые образцы.

7. Замораживание проводят поэтапно – сначала криопробирки охлаждают при температуре 2±8^оС в течение 5 минут, а потом помещают их в морозильную камеру при -18±2^оС на 24 часа.

 

Размораживание клеток

• Полностью разморозить содержимое криопробирок при 37^оС.

• Мягко ресуспендировать осадок клеток в криопробирке и внести весь объем образца в пробирку с 10 мл соответствующей культуре средой. 

 

Тщательно диспергировать клетки и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 2 минут. Надосадочную жидкость слить, а полученный осадок ресуспендировать в 1 мл питательной среды, содержащей 10% сыворотки крови крупного рогатого скота.

 

• Перед экспериментом произвести 1-2 пассажа культуры в соответствующих условиях.

• Для максимального удаления криопротекторов рекомендуется произвести полную замену среды через 1 сутки после начала культивирования клеток. 

• При необходимости, перед пассажем оценить количество жизнеспособных клеток в посевном материале при помощи окрашивания трипановым-синим.

 

Срок годности: 1 год

 

Условия хранения и транспортировки:

 

Хранить при температуре 2 - 8 ^оС в защищенном от света месте. Транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре 2- 8 ^оС.